植物組織培養(yǎng)的過(guò)程,植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程。謝謝

植物細(xì)胞組織培養(yǎng)
一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的技術(shù)性強(qiáng)，要求無(wú)菌操作，通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可初步掌握常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)，加深對(duì)無(wú)菌操作的了解。

二．實(shí)驗(yàn)原理

植物的全能性：植物體的任何一個(gè)細(xì)胞都具有生長(zhǎng)分化成為一個(gè)完整植株的能力，稱為植物的全能性。

植物組織培養(yǎng)就是利用植物的全能性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養(yǎng)的一門技術(shù)。植物組織培養(yǎng)按其原始意義，就是指愈傷組織培養(yǎng)。但發(fā)展至今，其范圍日益擴(kuò)大，已包括植物和它的離體器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。因此，擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術(shù)，即整體的、器官的、組織的、細(xì)胞的和原生質(zhì)的培養(yǎng)技術(shù)。它們的涵義是：
1．植株培養(yǎng)。指以具備完整植株形態(tài)的材料（如幼苗和較大的植株）外植體的無(wú)菌培養(yǎng)。

2． 胚胎培養(yǎng)。指以從胚珠中分離出來(lái)的成熟或未成熟胚為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。

3． 器官培養(yǎng)。指以植物的根，莖，葉，花，果等器官為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)，如根的根尖和切段，莖的莖尖，莖節(jié)和切段，葉的葉原基，葉片，葉柄，葉鞘和子葉，花器的花瓣，雄蕊（花藥，花絲），胚珠，子房，果實(shí)等的離體無(wú)菌培養(yǎng)。

4． 組織培養(yǎng)。指以分離出植物各部位的組織（如分生組織，形成層，木質(zhì)部，韌皮部，表皮，皮層，胚乳組織，薄壁組織，髓部等），或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。這是狹義的組織培養(yǎng)。

5． 細(xì)胞培養(yǎng)。指以單個(gè)的游離細(xì)胞（如用果酸酶從組織中分離的體細(xì)胞，或花粉細(xì)胞，卵細(xì)胞）為接種體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。

6． 原生質(zhì)體培養(yǎng)。指以除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。

本實(shí)驗(yàn)選擇煙草和豌豆為材料，煙草（Nicotiana）屬茄科植物，是重要的工業(yè)原料，也是植物組織培養(yǎng)的四大典型實(shí)驗(yàn)植物（煙草、矮牽牛、胡蘿卜、蕓苔）中重要的一種，它的研究的最為廣泛，也始終領(lǐng)先于其他的植物材料，目前，66個(gè)煙草品種中，再生成植株的有16個(gè)種，通過(guò)花藥培養(yǎng)再生成花粉植株的有12個(gè)種，通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)再生成植株的有20個(gè)種，通過(guò)煙草的種內(nèi)和種間原生質(zhì)體融合再生成雜種的植物分別為3個(gè)和12個(gè)種。豌豆（Pisum sativum）屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè)于采用的實(shí)驗(yàn)植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養(yǎng)可包括小至十幾微米的莖尖分生組織（生長(zhǎng)點(diǎn)）和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養(yǎng)。在實(shí)踐應(yīng)用上，常采用生長(zhǎng)點(diǎn)的培養(yǎng)使患病植物去病毒，以達(dá)到挽救優(yōu)良品種，提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。

三．實(shí)驗(yàn)材料

儀器設(shè)備

1．酒精燈、100ml三角燒瓶，9厘米培養(yǎng)皿植物組織培養(yǎng)的過(guò)程；

2．鑷子、剪刀、解剖針；

3．雙筒解剖顯微鏡；

4．光照培養(yǎng)箱或溫室；

材料和試劑

1．材料 煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。

2．試劑

（1）MS培養(yǎng)基，植物激素：NAA、6-BA等；

（2）飽和漂白粉液（次氯酸鈉）；

（3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

（4）無(wú)菌水

四．實(shí)驗(yàn)步驟

1．煙草無(wú)菌苗的快速切繁—繼代培養(yǎng)：（要求完全無(wú)菌操作）
每組一瓶煙草無(wú)菌苗，請(qǐng)細(xì)心操作，以免污染。
（1） 在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，點(diǎn)著酒精燈，將雙手用酒精棉球擦拭消毒，打開生長(zhǎng)好無(wú)菌煙草苗的三角瓶，三角瓶的瓶口使用前后需在酒精燈外焰上燒過(guò)滅菌。
（2） 用滅菌的鑷子輕輕捏出1株幼苗，用滅菌的剪刀將無(wú)菌苗剪成0.5-1厘米的小段，要求每段至少包含一個(gè)生長(zhǎng)點(diǎn)，直接剪入盛有MS培養(yǎng)基的三角瓶中，每一個(gè)切段必須直接接觸培養(yǎng)基，三角瓶口重新燒過(guò)滅菌，并重新封好口。
（3） 在光照培養(yǎng)箱中15~25℃，16小時(shí)光照條件下培養(yǎng)4周，可長(zhǎng)成完整植株，能用于田間移栽。
2．豌豆苗的莖尖培養(yǎng)
⑴ 取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無(wú)菌）用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。
⑵ 在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長(zhǎng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個(gè)葉原基的生長(zhǎng)錐。
⑶ 將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成，用封口膜將培養(yǎng)皿封好。
[4]在恒溫培養(yǎng)箱中，26℃下,培養(yǎng)六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養(yǎng)。